NovoNGS CUT Tag 2.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina):上海近岸科技出品。CUT&Tag(Cleavage Under Target & Tagmentation)是一種新興的蛋白質(zhì)-DNA互作研究方法,被用來替代傳統(tǒng)的ChIP-Seq方法。CUT&Tag在高活性轉(zhuǎn)座酶上融合了protein A/G抗體結(jié)合功能域,該功能域部分可以與靶向目的位點的抗體結(jié)合,使得Tn5轉(zhuǎn)座酶在目的位點上被原位栓系,并且在目的位點附近進行打斷的同時引入必要的接頭序列,隨后提取的DNA在經(jīng)過PCR擴增后直接得到用于測序的文庫。相比于被廣泛應(yīng)用的ChIP-Seq方法,CUT&Tag所需的細胞量更少,具有更高的信噪比和更好的可重復(fù)性。不需要進行甲醛交聯(lián)固定和超聲波打斷,也不需要通過連接法添加測序接頭,在簡化操作、節(jié)省時間的同時,也提供了應(yīng)用于單細胞測序研究的可能性。
試劑盒中包含了用于孵育抗體、轉(zhuǎn)座體,轉(zhuǎn)座體片段化的緩沖液和文庫構(gòu)建的整套相關(guān)試劑,并同時提供用于固定細胞的刀豆球蛋白A(ConA)磁珠。通過將細胞固定在ConA磁珠上,簡化了更換反應(yīng)體系和連續(xù)洗滌的操作,可以實現(xiàn)一管式操作。使用試劑盒提供的試劑和相應(yīng)的實驗流程,從細胞收集到PCR文庫構(gòu)建的整個實驗流程可以在一天內(nèi)完成。整個試劑盒中的所有酶和試劑都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制和殘留檢測,確保了所獲得文庫的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
NovoNGS CUT Tag 2.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)產(chǎn)品用途:
蛋白質(zhì)-DNA互作研究,在常見的哺乳動物細胞系上用于替代傳統(tǒng)的ChIP-Seq方法,特別適用于細胞數(shù)量較少的小樣本。也可應(yīng)用于經(jīng)過特殊處理的植物和酵母樣品上。
轉(zhuǎn)座體單鏈接頭序列:
Adaptor 1:
5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’
Adaptor 2:
5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’
ME:
5'-pCTGTCTCTTATACACATCT-3'
轉(zhuǎn)座體單鏈接頭序列:
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACIndex1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’