FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統
FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統可以為一系列應用到綠色熒光蛋白的分子和細胞生物學研究提供服務。在封閉式熒光成像系統上安裝了由軟件控制和電動驅動的濾波輪,以及一系列的濾光片組,可以對GFP、EGFP、wtGFP、YFP、BFP或者其它波段熒光蛋白和熒光素進行檢測和成像。
FluorCam封閉式GFP/Chl.熒光成像系統也可用于檢測植物發出葉綠素熒光的動態變化和空間分布,測量Kautsky效應過程、熒光淬滅及其它瞬時熒光過程(瞬變)并提供2維熒光圖像。專門設計的硬件配置使得本系統能夠自動轉換成熒光蛋白、熒光素成像或葉綠素熒光檢測成像。該系統高度集成,并且可以進行樣品的暗適應。
應用領域:
· 熒光蛋白與熒光素的熒光檢測
· 基因轉移和生物傳感器技術
· 轉基因植物研究
· 不同基因型抗性篩選
· 植物——微生物交互作用研究
· 植物——原生動物交互作用研究
· 植物光合特性和代謝紊亂篩選
· 生物和非生物脅迫的檢測
· 植物抗脅迫能力或者易感性研究
· 氣孔非均一性研究
· 代謝混亂研究
· 長勢與產量評估
功能特點:
· 操作簡便,測量樣品高度可調,集成了專用暗適應箱,方便被測植物的暗適應處理、操作等
· 高分辨率CCD,分辨率高達1392×1040像素,快速精確捕捉葉綠素熒光和GFP
· 可進行自動重復成像測量,可設置一個實驗程序(Protocols)自動循環成像測量,成像測量數據自動按時間日期存入計算機(帶時間戳)
· 帶有Kautsky誘導效應、熒光淬滅分析等各種通用實驗程序(protocols),測量分析參數達50多個
· 可選配TetraCam彩色成像模塊,成像面積20×25cm,用于葉片或植物形態測量分析
典型樣品:
葉片,莖,種子,根,整株小植物
愈傷組織,培養皿中的小苗
果實和花朵
藍細菌,綠藻,細菌
轉基因動物
技術參數:
測量參數:Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm',Fv/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII,NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qP,QY, QY_Ln,Rfd, ETR等50多個葉綠素熒光參數,每個參數均可顯示2維熒光彩色圖像
· 具備完備的自動測量程序(protocol),可自由對自動測量程序進行編輯
a) Fv/Fm:測量參數包括Fo,Fm,Fv,QY等
b) Kautsky誘導效應:Fo,Fp,Fv,Ft_Lss,QY,Rfd等熒光參數
c) 熒光淬滅分析:Fo,Fm,Fp,Fs,Fv,QY,ΦII,NPQ,Qp,Rfd,qL等50多個參數
d) 光響應曲線LC:Fo,Fm,QY,QY_Ln,ETR等熒光參數
e) PAR吸收與NDVI(選配)
f) QA再氧化動力學(選配)
g) GFP等靜態熒光成像測量
h) OJIP快速熒光動力學分析(選配):Mo(OJIP曲線初始斜率)、OJIP固定面積、Sm(對關閉所有光反應中心所需能量的量度)、QY、PI等26個參數
§ 高分辨率TOMI-2 CCD傳感器
a) 逐行掃描CCD
b) 圖像分辨率:1360×1024像素
c) 時間分辨率:在圖像分辨率下可達每秒20幀
d) A/D 轉換分辨率:16位(65536灰度色階)
e) 像元尺寸:6.45µm×6.45µm
f) 運行模式:1)動態視頻模式,用于葉綠素熒光參數測量;2)快照模式,用于GFP等熒光蛋白和熒光染料測量
g) 通訊模式:千兆以太網
光源板:4塊大型高強度封裝LED光源板,每個光源板由8×9 LEDs陣列,光源板有效面積與成像面積相同13×13cm
測量光:標配617nm紅光,其它波段可選,持續時間10µs–100µs可調
雙色光化光: 2紅光(617nm)+2藍光(470nm), Actinic1光強300µmol(photons)/m2.s,Actinic2光強2000µmol(photons)/m2.s;光化學光可升級至3000µmol(photons)/m2.s
飽和光閃:光強4000µmol(photons)/m2.s,可升級至6000 µmol(photons)/m2.s
成像面積:13×13cm,可對植物葉片、植物組織、藻類、苔蘚、地衣、整株植物或多株植物、96孔板、384孔板等進行成像分析
GFP測量模塊:7位濾波輪及專用濾波片,用于測量GFP(綠色熒光蛋白)
PAR吸收測量模塊(選配):遠紅光740nm(FAR)、660nm雙色LEDs光源板及專用濾波片,用于測量PAR吸收及NDVI
QA在氧化動力學成像分析(選配):可進行STF熒光動力學分析測量,單周轉光閃(STF)光強達120000 µmol(photons)/m2.s in100µs
OJIP快速熒光動力學模塊(選配):時間分辨率達1µs,可測定分析OJIP曲線與二十幾項相關參數包括:Fo、Fj、Fi、P或Fm、Vj、Vi、Mo、Area 、Fix Area、Sm 、Ss、N(QA還原周轉數量)、Phi­­­_Po 、Psi_o 、Phi_Eo、Phi_Do、Phi_pav、ABS/RC(單位反應中心的吸收光量子通量)、TRo/RC(單位反應中心初始捕獲光量子通量)、ETo/RC(單位反應中心初始電子傳遞光量子通量)、DIo/RC(單位反應中心能量散失)、ABS/CS(單位樣品截面的吸收光量子通量)、TRo/CSo、RC/CSx(反應中心密度)、PIABS(基于吸收光量子通量的“性能”指數或稱生存指數)、PIcs(基于截面的“性能”指數或稱生存指數)
紫外LED光源板(選配):365nm或385nm,1)測量多色熒光(詳見FluorCam多光譜熒光成像系統);2)測量wtGFP(野生型綠色熒光蛋白)、DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚,一種熒光染料)
藍色LED光源板(選配):470nm,1)測量EGFP(增強型綠色熒光蛋白);2)用于氣孔功能研究
綠色LED光源板(選配):530nm,測量YFP(黃色熒光蛋白)
*測量wtGFP、DAPI、EGFP、YFP等熒光蛋白或熒光染料還需要選配相應濾波片
FluorCam葉綠素熒光成像分析軟件功能:具Live(實況測試)、Protocols(實驗程序選擇定制)、Pre–processing(成像預處理)、Result(成像分析結果)等功能菜單
客戶定制實驗程序協議(protocols):可設定時間(如測量光持續時間、光化學光持續時間、測量時間等)、光強(如不同光質光化學光強度、飽和光閃強度、調制測量光等),具備專用實驗程序語言和腳本,用戶也可利用Protocol菜單中的向導程序模版自由創建新的實驗程序
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自動測量分析功能:可設置一個實驗程序(Protocol)自動無人值守循環成像測量,重復次數及間隔時間客戶自定義,成像測量數據自動按時間日期存入計算機(帶時間戳)
快照(snapshot)模式:通過快照成像模式,可以自由調節光強、快門時間及靈敏度得到清晰突出的植物樣本穩態熒光和瞬時熒光圖片
成像預處理:程序軟件可自動識別多個植物樣品或多個區域,也可手動選擇區域(Region of interest,ROI)。手動選區的形狀可以是方形、圓形、任意多邊形或扇形。軟件可自動測量分析每個樣品和選定區域的熒光動力學曲線及相應參數,樣品或區域數量不受限制(>1000)
數據分析模式:具備“信號計算再平均”模式(算數平均值)和“信號平均再計算”模式,在高信噪比的情況下選用“信號計算再平均”模式,在低信噪比的情況下選擇“信號平均再計算”模式以過濾掉噪音帶來的誤差
輸出結果:高時間解析度熒光動態圖、熒光動態變化視頻、熒光參數Excel文件、直方圖、不同參數成像圖、不同ROI的熒光參數列表等
CCD檢測器帶寬:400–1000nm
· 給光制度:靜態或動態(竇式)
· 光譜響應:540nm處量子高(70 %),400nm和650nm處轉降50%
· 讀出噪音:低于12eRMS,典型10e
· 滿阱容量:大于70,000 e (unbinned)
· Bios:固件可升級
· 通訊方式:千兆以太網
· 尺寸:471 mm(W)×473 mm (D)×512 mm (H)
· 重量:Appr. 40 kg
· 電源輸入:Appr. 1100 W
· 供電電壓:90–240 V
典型應用:
上海生命科學研究院使用FluorCam測量獲得的GFP成像圖,圖中發出明亮顏色的植株即為表達了GFP的植株,其顏色越偏向紅色,則表明其表達的GFP更多
鈕扣珊瑚蟲收縮-膨脹不同時相(T1=0分,T2=30分,T3=60分)NDVI與GFP成像分析(Miguel,2014)
產地:歐洲